Caracterización de la muerte celular en tejidos hormonodependientes : análisis bioquímico, immunocitoquímico y ultraestructural
Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2000.
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2024
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| author | Aoki, María del Pilar |
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| collection | Repositorio Digital Universitario |
| description | Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2000. |
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| institution | Universidad Nacional de Cordoba |
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| publishDate | 2024 |
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| spelling | rdu-unc.5542532024-11-13T06:24:48Z Caracterización de la muerte celular en tejidos hormonodependientes : análisis bioquímico, immunocitoquímico y ultraestructural Aoki, María del Pilar Maldonado, Cristina Alicia Hliba, Ernesto Masini de Repiso, Ana María de las Mercedes Sotomayor, Claudia Elena Lactancia Inmunoquímica Bioquímica Inmunología Apoptosis Postlactancia Preñez Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2000. Fil: Aoki, María Del Pilar. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Aoki, María del Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. El lóbulo anterior de la glándula hipofisaria contiene varios tipos celulares secretorios, cuyas proporciones fluctúan bajo condiciones fisiológicas o experimentales en respuesta a cambios en el medio ambiente hormonal. La estimulación sostenida de un tipo celular específico resulta en proliferación, mientras que la finalización del estímulo revierte el proceso con la consecuente pérdida de células excedentes por muerte celular. El estudio de la muerte celular lleva a discriminar diversos tipos que se presentan en un marco fisiológico; entre ellos la apoptosis ha sido ampliamente considerada como el proceso responsable de la hipoplasia de tejidos hormonodependientes. Sin embargo, no todas las muertes celulares que ocurren en tales tejidos muestran este patrón estereotipado morfológico. Durante la preñez y la lactancia, cuando se incrementan los requerimientos de prolactina (PRL), las lactotropas proliferan. La interrupción de la lactancia es seguida por una pérdida masiva de esta población, la que progresivamente decrece hasta alcanzar la proporción previa. Las células afectadas no presentan la ultraestructura reconocida como indicativa de apoptosis, sino que a diferencia de ésta los primeros signos de muerte se observan a nivel citoplasmático, mientras que el núcleo mantiene su forma y la cromatina se condensa. El objetivo del presente trabajo de Tesis es profundizar el conocimiento sobre la muerte celular que ocurre en ratas como consecuencia de cambios hormonales, tanto en modelos in vivo como in vitro. En particular se evalua la adenohipófisis frente a distintas situaciones que inducen regresión. El trabajo tiende a esclarecer la participación de la apoptosis, así como de otro tipo de muerte celular pobremente descripto, durante procesos fisiológicos en tejidos de mamíferos. En primer lugar, se estudió el proceso de involución de la hipófisis postdestete en comparación con el de la próstata luego de la orquidectomía, bajo parámetros ultraestructurales y técnicas de detección de apoptosis. En la glándula pituitaria se comprobó que la regresión fue independiente del proceso apoptótico, mientras que en la próstata, clásico modelo de involución por esta muerte, se detectaron numerosas células que morían como células negras a escasas horas postcastración. Entre los distintos parámetros analizados se estudió la expresión de la oncoproteína P53, la que se detecta en algunos núcleos de la adenohipófisis a las 12- 24h postdestete, alcanzando un fuerte incremento a las 48h y finalmente una notable disminución hacia las 72h. El seguimiento paralelo del ciclo estral permitió comprobar que la franca caída de la expresión a las 72h coincide con la ovulación que ocurre al tercer día debido a la reanudación de los ciclos interrumpidos durante la lactancia. Así como las células secretoras prostáticas pueden desarrollar tanto uno como otro perfil de muerte ¿serían susceptibles las células lactotropas a desencadenar muerte por apoptosis bajo determinadas condiciones? Para dar respuesta a este interrogante se diseñaron modelos experimentales en el marco de la postlactancia, prolongando la señal inhibitoria de liberación de PRL con un agonista de dopamina (bromocriptina), inhibidor tónico de la secreción de PRL. La regresión evidenció células apoptóticas solamente cuando además de la inhibición se suprimieron los estrógenos por ovariectomía realizada en el mismo día del destete. Confirmando lo hallado en las hembras postlactantes, el tratamiento con bromocriptina en animales machos y hembras previamente estrogenizados, puso en evidencia un dimorfismo sexual en la inducción de la apoptosis. Estos resultados demostraron claramente que los estrógenos ejercen un rol protector frente a este tipo particular de muerte. Cabe destacar que en todos los modelos la forma de muerte predominante fue la no apoptótica con las características de células negras, las cuales, en algunos casos, coexisten con un número muy bajo de células en apoptosis. Para actuar de un modo directo sobre la acción de sobrevida del estrógeno se realizaron tratamientos con tamoxifeno (antiestrógeno no esteroideo) en animales 1 v.JJui U flSI 1 hembras intactos previamente estrogenizados. A los distintos tiempos analizados, tamoxifeno indujo muerte celular por apoptosis presentando diversos estadios morfológicos intermedios, sin participación de las células negras en involución. A los fines de independizar a la célula lactotropa de la compleja regulación neuroendocrina a la que está sometida, se realizaron cultivos primarios de adenohipófisis los que fueron sometidos a una estimulación previa con estrógenos por 48h y posteriormente a distintos tratamientos. Las células lactotropas respondieron desencadenando apoptosis masiva al combinar el efecto estimulatorio del estrógeno y el inhibitorio de tamoxifeno. Por sí sólo, este último ejerce su efecto inhibitorio tanto de la actividad de síntesis y secreción de estas células, sin desencadenar su muerte. También se observaron células en apoptosis cuando los cultivos fueron mantenidos en medio carente de suero, debido a que se los priva de estrógeno y otros factores de crecimiento. Este mecanismo fue extensivo a otras poblaciones celulares no lactotropas. Cuando los cultivos fueron tratados con dopamina en presencia de estrógeno, también se obtuvieron núcleos apoptóticos con predominio de formas morfológicas intermedias. La TRH, principal factor estimulante de la síntesis y secreción de PRL, evitó la apoptosis desencadenada por la supresión de factores de crecimiento del suero, e indujo una marcada activación de la síntesis y secreción de PRL. Estos resultados en conjunto ponen en evidencia que las células lactotropas pueden morir por dos mecanismos diferentes: como células negras o por apoptosis, dependiendo de las señales que recibe del entorno hormonal, así como de su estado funcional. El primer mecanismo se inicia rápidamente y es irreversible, en tanto que la apoptosis necesita señales marcadamente contrapuestas. Fil: Aoki, María Del Pilar. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Fil: Aoki, María del Pilar. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. 2024-11-12T18:09:49Z 2024-11-12T18:09:49Z 2000 doctoralThesis http://hdl.handle.net/11086/554253 spa Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
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