Interacción de la lectina de Agaricus Bisporus con las cadenas de O- y N- glicanos de las subclases de IgA humana
Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 1996.
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2024
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| author | Irazoqui, Fernando José |
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| description | Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 1996. |
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| institution | Universidad Nacional de Cordoba |
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| publishDate | 2024 |
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| spelling | rdu-unc.5537832024-09-26T06:24:30Z Interacción de la lectina de Agaricus Bisporus con las cadenas de O- y N- glicanos de las subclases de IgA humana Irazoqui, Fernando José Vides, Miguel Angel Nores, Gustavo Alejandro Sosa, Virginia Estela Landa, Carlos Alberto Glicoproteinas Inmunoglobulinas Inmunología Proteínas Lectinas Tesis (Dr. en Ciencias Químicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 1996. Fil: Irazoqui, Fernando José. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Irazoqui, Fernando José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. En el presente trabajo de Tesis se realizaron estudios de interacción entre la lectina de Agar/cus bisporus (ABL) y las cadenas de O- y N-glicanos de las subclases de IgA humana. En una primera instancia, se purificó la lectina por cromatografia de afinidad, obteniéndose una recuperación del 52% de la actividad hemoaglutinante, con un incremento de la actividad específica de 142 veces respecto al extracto inicial. Por estudios de interacción secundaria de ABL con inmunoglobulinas humanas, se pudo comprobar que la lectina precipita a IgAl e IgD en distintas condiciones experimentales. Dichas glicoproteínas contienen el disacárido-T (Galf33GalNAc) como componente de sus cadenas de O-glicanos. Estos resultados son coincidentes con la especificidad de unión de ABL por Gall33GalNAc, obenida por ensayos de inhibición de la hemoaglutinación. Mediante estudios de interacción primaria, pudo observarse que columnas de afinidad de ABL-Sepharose tienen la capacidad de retener a IgA2 secretoria, glicoproteína en la que no se ha descripto la presencia de O-glicanos ni GalJ33GalNAc como parte de sus oligosacáridos. La interacción primaria de ABL con IgAl y otras inmunoglobulinas humanas que sólo poseen N-glicanos, como IgA2 monoclonal e IgG, también fue observada por ensayos de dot biot y enzimo-lectina ensayo (ELA) competitivo. Experimentos adicionales con peptido N-glicosidasa F (PNGasa F), enzima que hidroliza oligosacáridos en la unión entre asparragina y G1cNAc, permitieron Jnteacción de ABL con glicanos de IgA demostrar que las cadenas de N-glicanos de IgA2 e IgG son las que median la interación de ABL con estas inmunoglobulinas. Los terminales más comunmente encontrados en las cadenas de N-glicanos de IgA e IgG son Nacetillactosaminas, siendo probablemente el ligando de ABL en la interacción con N-glicanos. A pesar de que N-acetillactosamina no fue capaz de inhibir la hemoaglutinación de ABL ni desplazar ABL-peroxidasa en los estudios de interacción primaria, la interacción de ABL con N-acetillactosamina pudo ser demostrada cuando se utilizó un glicopéptido con varias moléculas de Nacetillactosamina conjugadas a albúmina sérica bovina. Esta constante de afinidad es del mismo orden de magnitud que la obtenida entre ABL e IgA2. También se profundizó en el conocimiento de la especificidad de ABL mediante ensayos de ELA competitivo, utilizando distintos carbohidratos como posibles inhibidores de la interación. Estos resultados fueron analizados comparativamente con las estructuras de los disacáridos obtenidas por modelado molecular, intentando explicar las regiones más relevantes de los disacáridos que participan en la interacción con ABL. A modo de conclusión general, se podría afirmar que la complementación de ABL con PNGasa F sería una herramienta de gran utilidad en el seguimiento de O-glicanos de IgAl humana. Esta herramienta podría aplicarse en la comparación de O-glicanos de IgAl en diferentes patologías o en la correlación con posibles funciones efectores alteradas de IgAl, como también en el análisis de la expresión de O-glicanos en moléculas recombinantes de IgAl humana. Fil: Irazoqui, Fernando José. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica; Argentina. Fil: Irazoqui, Fernando José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. 2024-09-25T11:03:42Z 2024-09-25T11:03:42Z 1996 doctoralThesis http://hdl.handle.net/11086/553783 spa Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
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