Impacto de las estrategias de formulación en la inmunogenicidad de una vacuna de subunidad : caracterización de la respuesta inmune y propiedades fisicoquímicas
Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2024
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2024
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| description | Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2024 |
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| spelling | rdu-unc.5534562024-08-31T06:24:01Z Impacto de las estrategias de formulación en la inmunogenicidad de una vacuna de subunidad : caracterización de la respuesta inmune y propiedades fisicoquímicas Ruiz Moreno, Federico Nahuel Maletto, Belkys Angélica Palma, Santiago Daniel Morón, Victor Gabriel Gruppi, Adriana Lacconi, Gabriela Inés Pérez, Ana Rosa Inmunología Nanoestructuras Inmunización Vacunas Inmunidad Propiedades físicas Propiedades químicas Células madre Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2024 Fil: Ruiz Moreno, Federico Nahuel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Desde el año 2009, nuestro grupo interdisciplinario, compuesto por inmunólogos y expertos en tecnología farmacéutica, ha estado trabajando en el desarrollo de una formulación innovadora que combina un oligodesoxinucleótido sintético de simple cadena que contiene motivos CpG no metilados (CpG-ODN), con una nanoestructura bilamelar de cristal líquido, formada mediante el autoensamblaje de palmitato de 6-O-ascorbilo (Coa-ASC16). Esta formulación tiene como objetivo optimizar las propiedades adyuvantes del CpG-ODN, un componente aprobado para uso en humanos como adyuvante de vacunas. Para evaluar la eficacia de esta estrategia adyuvante, se incorporó la proteína ovoalbúmina (OVA) como modelo antigénico, creando la formulación OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16. Desde entonces, una serie de estudios científicos realizados por nuestro grupo se han enfocado en caracterizar la respuesta inmune inducida por esta nanoformulación y desentrañar los mecanismos subyacentes a su acción con el objetivo de conocer cómo la nanoformulación influye en la respuesta inmune final. Estos estudios han revelado importantes cualidades inmunogénicas de la nanoformulación y han permitido develar algunos de los mecanismos por los cuales opera. Durante el desarrollo de esta tesis doctoral, además de la formulación OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 (donde el antígeno y el inmunoestimulante son formulados a través de un proceso de calentamiento/enfriamiento), se evaluaron otras estrategias de formulación de los componentes OVA y CpG-ODN en solución, es decir, sin Coa-ASC16. Estas estrategias incluyeron: OVA/CpG-ODN (componentes en solución sin calentamiento adicional), OVA/CpG-ODNɸ (componentes en solución calentados y enfriados), ɸOVA/CpG-ODN (sólo OVA calentada/enfriada), y OVA/ɸCpG-ODN (sólo CpG-ODN calentado/enfriado). Los resultados de nuestros estudios fueron contundentes: la formulación OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 induce una respuesta de anticuerpos, como así también de células B y T de memoria, significativamente mayor en comparación con las formulaciones en solución. Además, las formulaciones OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 y OVA/CpG-ODNɸ son capaces de inducir una respuesta de anticuerpos independiente de interferones tipo I. Al analizar los fenotipos celulares involucrados en la respuesta inmune de anticuerpos, concluimos que la formulación OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 supera a las formulaciones en solución en la generación de células B específicas para el antígeno (células B de memoria, plasmoblastos, y células de centro germinal) y células T CD4+ foliculares. Además, esta nanoformulación también fue la mayor inductora de células secretoras de anticuerpos específicos contra OVA. Otro hallazgo crucial fue que sólo la formulación OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 logró un efecto de liberación sostenida del antígeno desde el sitio de inyección, lo que podría estar relacionado con una respuesta más robusta de centro germinal y, por ende, una mejor respuesta inmune de anticuerpos. Estudios de dicroísmo circular indicaron que el calentamiento afecta la estructura de los componentes, especialmente de OVA, lo cual podría explicar la mejora en la respuesta inmune de anticuerpos observada en las formulaciones OVA/CpG-ODNɸ y ɸOVA/CpG-ODN. Adicionalmente, mediante microscopía confocal RAMAN, se determinó que las moléculas del antígeno y el adyuvante están en contacto dentro de la plataforma Coa-ASC16, lo que también podría contribuir a la mejora de la respuesta inmune de OVA/CpG-ODN/Coa-ASC16 en comparación con las otras formulaciones solubles. Finalmente, se comprobó que la esterilización y el almacenamiento en diversas condiciones no alteran la respuesta inmune inducida por la nanoformulación. En conclusión, proponemos el sistema CpG-ODN/Coa-ASC16 como una plataforma de vacunación prometedora debido a su capacidad para generar una respuesta inmune robusta, además de demostrar ser un sistema estable, seguro y de fácil elaboración. Este trabajo no sólo aporta una nueva estrategia en el diseño de vacunas, sino que también abre nuevas perspectivas en la optimización de adyuvantes para mejorar la inmunogenicidad de vacunas a subunidades. 2026-07-31 Fil: Ruiz Moreno, Federico Nahuel. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. 2024-08-30T14:40:14Z 2024-08-01 doctoralThesis http://hdl.handle.net/11086/553456 spa Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0/ |
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