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|a La aceulcolinesterasa eritrocitaria bovina (AEB) es una enzima asociada a la membrana :as atca de eriti-ocitos por medio de un anclaje hidrofóbico de tipo glicofosfatidilinositol (GPI). Este contado permitiría la transmisión de información entre la proteína y la interfase, afectando su actrw’dad catalítica. En consecuencia, los filmes de Langmuir-Blodgett (LB) podrían ser utilizados para evaluar los efectos del empaquetamiento molecular de la membrana en la actividad de la AEB. En el presente trabajo, se prepararon filmes de Langmuir a partir de suspensiones de .esiculas de membranas eritrocitarias bovinas purificadas (MEB) y se estudiaron sus propiedades interfasiales. Las isotermas de presión superficial (Tr)-área mostraron una transición bidimensional nt = 15.6 ± 1,4 mN/m correspondiente con módulo de compresibilidad K = 65,5 ± 1,6 mN/m. La presión de colapso fue u0 = 45,5 ± 1,3 mN/m, con un K0 = 36,6 ± 0,7 mNIm. Estos valores de K y K0 indican un comportamiento de tipo líquido expandido a lo largo de toda la isoterma. Estas monocapas se transfirieron a soportes hidrofóbicos planos (LBMEB) a dos u, 10 mN/m (LB10) y 35 mN/m (LB35), y fueron utilizados como fuente de enzima para estudiar la cinética de hidrólisis del sustrato artificial acetiltiocolina a 37°C, que da como productos tiocolina más acetato. A diferencia de lo observado para otras proteínas incorporadas a membranas, donde el aumento en la ‘ir indujo un cambio hacia una cinética sigmoidea, para la AEB se obtuvo una cinética de tipo michaeliana para todos los tratamientos. En la membrana en suspensión, los parámetros cinéticos fueron Vmax = 3,41 ± 0,15 nmoles P/min’pg prot. y KM = 0,11 ± 0,02 mM. En los filmes LB10, se obtuvo una Vmax = 0,021 ± 0,002 nmoles P/min’pg prot y una KM = 0,047 ± 0,017 mM, mientras que en los filmes LB35, los parámetros fueron Vmax = 0,030 ± 0,003 nmoles P/min’pg prot. y KM = 0,026 ± 0,017 mM. La considerable disminución de Vm en los filmes LB con respecto a las MEB en suspensión puede asociarse a distintos factores, como un posible desplegamiento de AEB en la interfase agua-aire, la disminución en los grados de libertad en el movimiento de la enzima, el cambio en la estructura del agua y su menor disponibilidad como sustrato para la reacción catalítica, y el cambio en el orden de la reacción debido a la modificación de la dimensionalidad en a distribución topográfica de la enzima. Por otra parte, el valor significativamente menor de la KM en los LB respecto a los LB10, puede explicarse por el hecho de que, a medida que aumenta el empaquetamiento molecular, aumenta la densidad de cargas negativas en la superficie de la membrana, lo que favorecería la difusión del sustrato hacia la superficie del filme.
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