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|a La carboxilasa pinívica (piruvatosCOg ligasa (ADP), 3.0. 6.4«1«1.) ha sido purificada a partir de levadura de panaderíaCSacoharomyces^ oerovisiae). La enzima se ha obtenido homogénea a la ultracentri-fugación analítica, con una purificación de 520 veces y un rendimiento del 10 $>, con respecto al extracto crudo. El producto ds la reacción de oarboxilación del piruvato es el oxaloacetatoj existe relación estequiomátrica entre el piruvato consumido, y el oxaloacetato, ABP y P¿ formados. Se requieren estrictamente Hg4"4" y ATP, y la enzima es activada por K4" y por Acetil-CoA o CoA. El K4" puede ser parcialmente sustituido por Rb+ o por NH^+, mientras que el Na+ y el Li4" no solo no lo reemplazan, sino que inhiben la reacción en presencia de K, i _i_ SI Mg4"1" puede ser parcialmente reemplazado por Un4"4", pero el Ca , Sr++,Co , Cu4"1" y Sn4"l"son incapaces de sustituirlo, inhibiendo, en cambio, la reacción en pr-sencia de Mg4"4". La concentración óptima de Hg++ está intimamente relacionada con la concentración de ATP, y el verdadero activador sería,presumiblemente, el complejo ATPMg"2. La Acetil-CoA presenta mayor efecto activador que la CoA, pero, a diferencia de la enzima de hígado de pollo, no es indispensable. La enzima requiere edtrictamente nucleótidos de adeninaj todos los nucleósidos di y trifosfato ensayados, en presencia de ATP, inhiben la reacción. El sustrato do la reacción es el piruvato, siendo el PEP incapaz de sustituirlo. Se han determinado los valores de E— para piruvato,ATP y 21 pH óptimo de actividad es 8,0, y la temperatura óptima. 35° C. laciÓn es solo el 2 % de la velocidad de fijación de anhídrido carbónico. ' La carboxilasa pinívica es inhibida por reactivos de tioles, sieri do el más efectivo el p-CMB| el 2-4-dinitrofenol ejerce también e. fecto inhibidor, aunque menos marcado. ":1 fluoruro y la azida son inactivos. La actividad enzimática es completamente inhibida por la avidina aiín en el caso en que la reacción ya esté" en marcha, indicando la participación de la biotina. Esto, junto con la demostración de que la enzima cataliza una reacción de intercambio entre ATP y que requiere ADP.Mg } Acetil-CoA y K , y una reacción de intercambio entre oxaloacetato y piruvato-3-C , que no requiere nin -giln cofactor, permite asignar a la carboxilasa pinívica de levadu ra el mecanismo propuesto para otras carboxilasas con biotina Se .discuten las probables funciones de la carboxilasa pirdVica de levadura, que participaría en la gluconeogénesis y en la regulación del ciclo de los acidia tricarboxílicos.
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