Caracterización biofísica de membranas naturales de insecto y mamífero que contienen R-GABA. Bases para el desarrollo de superficies funcionalizadas
Fil: Colmano, Guillermo Nicolás. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales; Argentina.
| Main Author: | |
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| Format: | doctoralThesis |
| Language: | spa |
| Published: |
2024
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| Online Access: | http://hdl.handle.net/11086/553250 |
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| author | Colmano, Guillermo Nicolás |
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| author_facet | Turina, Anahí del Valle Colmano, Guillermo Nicolás |
| author_sort | Colmano, Guillermo Nicolás |
| collection | Repositorio Digital Universitario |
| description | Fil: Colmano, Guillermo Nicolás. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales; Argentina. |
| format | doctoralThesis |
| id | rdu-unc.553250 |
| institution | Universidad Nacional de Cordoba |
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| publishDate | 2024 |
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| spelling | rdu-unc.5532502024-08-14T06:22:59Z Caracterización biofísica de membranas naturales de insecto y mamífero que contienen R-GABA. Bases para el desarrollo de superficies funcionalizadas Colmano, Guillermo Nicolás Turina, Anahí del Valle Sánchez-Borzone, Mariela Eugenia Triatoma infestans Bos taurus Lipidoma Films de Langmuir Microscopia de Fluorescencia Espectroscopia de Fluorescencia Fil: Colmano, Guillermo Nicolás. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales; Argentina. Las membranas biológicas son complejos ensambles de lípidos y proteínas organizados, con propiedades biofísicas que varían en respuesta a su composición y estructura. Las proteínas transmembrana (como el Receptor GABA) se encuentran íntimamente asociadas a la membrana lipídica que las rodea, y por ende su actividad estará modulada por su ambiente lipídico. Los estudios biofísicos en membranas naturales son escasos, más aún los realizados en membranas naturales de insectos. Es por eso que esta tesis doctoral tiene como objetivo principal la caracterización detallada de la composición, estructura y comportamiento biofísico de dos membranas naturales biológicamente equivalentes que contienen Receptores GABA, con el fin de sentar las bases para un futuro desarrollo de superficies funcionalizadas que puedan ser utilizadas a modo de biosensor. Las membranas naturales de sinaptosomas de Bos taurus y Triatoma infestans fueron caracterizadas biofísicamente mediante films de Langmuir, Microscopia de Fluorescencia y Espectroscopia de Fluorescencia. La composición detallada de sus membranas lipídicas fue determinada mediante HPLC - MS/MS obteniendo así su lipidoma, el cual en el caso de T. infestans es el primero en ser reportado. En base a estos análisis comprobamos que las dos membranas son marcadamente diferentes en cuanto a su composición lipídica y dichas diferencias son reflejadas en su comportamiento biofísico. Las fracciones lipídicas de estas membranas (proteínas removidas) fueron caracterizadas del mismo modo descripto anteriormente, para determinar cuánto del comportamiento observado en las membranas naturales puede ser explicado por los lípidos de membrana. Lo obtenido nos demostró que la fracción proteica cumple un rol importante en ambas membranas modificando diversas propiedades al ser removida. Se diseñaron dos membranas artificiales biomiméticas con el fin de evaluar si una mezcla cuaternaria de lípidos seleccionados era capaz de imitar aceptablemente el comportamiento de la fracción lipídica o parte de este comportamiento. Estas membranas biomiméticas fueron también caracterizadas con las mismas metodologías y de su estudio resultó que ninguna de las membranas biomiméticas se comportó exactamente como la fracción lipídica correspondiente. Sin embargo, algunas tendencias se reprodujeron, por lo que mediante el ajuste en las proporciones y la utilización de otras especies lipídicas se podría llegar a modelos que emulen mejor el comportamiento buscado. Luego de ser caracterizados, los sistemas descriptos (membranas naturales, fracciones lipídicas y membranas biomiméticas) fueron investigados en función de su respuesta frente a la interacción con el insecticida lipofílico GABAérgico Fipronil. El compuesto fue capaz de insertarse en las membranas estudiadas, generando efectos observables en todas ellas con las diversas metodologías empleadas. 6 Se realizaron estudios exploratorios de los Receptores GABA presentes en las membranas naturales. Su presencia fue evidenciada mediante estudios con radioligandos y técnicas electroforéticas; además en las membranas de Bos taurus los receptores fueron detectados mediante inmunomarcado. Logramos generar superficies funcionalizadas transfiriendo las membranas a un soporte sólido, las cuales fueron caracterizadas biofísicamente. Este modelo permitió describir la interacción de un compuesto lipofílico con la membrana. Este trabajo representa un relevante aporte a los estudios de membranas naturales, demostrando cómo dos membranas pueden ser composicionalmente distintas y poseer propiedades marcadamente diferentes y aun así ser equivalentes en cuanto a su función biológica. A su vez, resalta la importancia de realizar estudios con membranas naturales para poder diseñar y optimizar modelos de membrana biológica. Fil: Colmano, Guillermo Nicolás. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales; Argentina. 2024-08-13T12:07:57Z 2024-08-13T12:07:57Z 2023 doctoralThesis http://hdl.handle.net/11086/553250 spa |
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