Estudio de los aspectos moleculares y celulares involucrados en la aterosclerosis : expresión y función del sistema α2-macroglobulina/LRP1 en monocitos de sangre periférica y macrófagos
Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016.
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2020
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| collection | Repositorio Digital Universitario |
| description | Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016. |
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| id | rdu-unc.15534 |
| institution | Universidad Nacional de Cordoba |
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| publishDate | 2020 |
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| spelling | rdu-unc.155342020-07-01T05:06:51Z Estudio de los aspectos moleculares y celulares involucrados en la aterosclerosis : expresión y función del sistema α2-macroglobulina/LRP1 en monocitos de sangre periférica y macrófagos Ferrer, Darío Germán Darío Germán Chiabrando, Gustavo Alberto Hallak, Marta Elena Rivero, Virginia Elena Castro, Claudia M. Casale, César Horacio Marcadores biológicos Mediadores de inflamación Péptido Hidrolasas Macrofagos Citocinas alfa-macroglobulinas Factores de transcripción Aterosclerosis Inmunología Tesis (Doctor en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2016. Ferrer, Darío Germán. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Chiabrando, Gustavo Alberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Hallak, Marta Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Rivero, Virginia Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Castro, Claudia M. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Casale, César Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biotecnología Ambiental y Salud; Argentina. La 2-macroglobulina (2M) y su receptor LRP1 (por lowdensitylipoprotein receptor-relatedprotein 1) tienen una activa participación en el control de la proteólisis extracelular y activación del componente celular implicado en los procesos inflamatorios. En el presente trabajo de tesis doctoral se propuso dilucidar el rol del sistema 2M/LRP1 en la migración de macrófagos. Por otra parte, basados en la evidencia de que los monocitos cumplen un rol clave en el inicio y progresión de la ateroesclerosis, y considerando que LRP1 está incrementado en el componente celular de la lesión ateroesclerótica, resultó de interés investigar la expresión de este receptor en monocitos circulantes de ratón y humano. A través de ensayos de wound-healing y microscopía confocal se demostró que 2M induce un aumento de la motilidad de células derivadas de monocito-macrófagos RAW264.7, promoviendo modo migratorio mesenquimal caracterizado por: i) redistribución subcelular de MT1-MMP, FAK, p-FAK y β1-integrinahacia protrusiones celulares; ii) aumento de la secreción de MMP-9, polimerización de actina (F-actina); y iii) redistribución subcelular y tráfico intracelular de LRP1 hacia las protrusiones celulares. Por otra parte, también se estableció que 2M induce un aumento significativo en el nivel de colocalización de LRP1 con β1-integrina en estructuras vesiculares que está próximas a las protrusiones celulares. Empleando ensayos de citometría de flujo, se demostró que LRP1 se expresa en monocitos y no en otros componentes leucocitarios de sangre periférica, tales como linfocitos y neutrófilos, de ratones C57BL/6J. Esta expresión diferencial pan-leucocitaria de LRP1 permitió caracterizar tres subpoblaciones monocíticas: Ly6ChiLRP1hi, Ly6ChiLRP1lo y Ly6CloLRP1lo. Por otra parte, también se demostró que los niveles de LRP1 disminuyeron de manera significativa en la subpoblación monocítica murina Ly6ChiLRP1hi en ratones deficientes de la Apolipoproteína E (KO ApoE-/-) con evidente presencia de placa ateroesclerótica. Por último, a través de ensayos de citometría de flujo basados en la detección de LRP1 como marcador monocítico se pudo identificar las diferentes subpoblaciones de monocitos circulantes humanos, a saber: clásicos [CD14++CD16-], intermedios [CD14++CD16+] y no clásicos [CD14+CD16++]. A su vez, se demostró que las diferentes subpoblaciones de monocitos humanos expresan de manera diferencial LRP1, siendo significativamente mayor en monocitos clásicos e intermedios que en no clásicos. Finalmente, α2M* indujo cambios en la expresión de LRP1 a nivel de la superficie celular en las distintas subpoblaciones de monocitos humanos. Estos efectos también se asociaron con la producción de protrusiones celulares, similar a lo observado en células RAW264.7, siendo esto último más evidente en la subpoblación no clásicade monocitos. En conclusión, en este trabajo de tesis se demostró qué: i) el sistema α2M*/LRP1 induce la migración de macrófagos a través de un modo mesenquimal; ii) LRP1 es un marcador de monocitos que permite determinarla heterogeneidad de subpoblaciones;y iii) LRP1 se expresa de manera diferencial en cada subpoblación de monocitos circulantes de ratón y humano. Estos hallazgos le confieren a LRP1 un gran potencial en el diagnóstico clínico de enfermedad ateroesclerótica, al ser utilizado como un biomarcador temprano de ésta patología inflamatoria crónica. Ferrer, Darío Germán. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Chiabrando, Gustavo Alberto. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Hallak, Marta Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Química Biológica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentina. Rivero, Virginia Elena. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Castro, Claudia M. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina. Casale, César Horacio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biotecnología Ambiental y Salud; Argentina. 2020-06-30T14:58:20Z 2020-06-30T14:58:20Z 2016 doctoralThesis http://hdl.handle.net/11086/15534 spa Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Internacional http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ |
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