Estudio de las moléculas involucradas en el transporte de hidrolasas solubles a vacuolas lisosomales en el protozoario parásito Giardia lamblia - Miras, Silvana Lorena Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas ([s. n.], 2013)
En Giardia, las vacuolas periféricas (PVs) tipo lisosomas, deben coordinar específicamente su función endosomal/lisosomal para realizar con éxito la endocitosis, degradación y el direccionamiento de proteínas. Si bien, la presencia de proteínas características de estos compartimientos ha sido descripta en las PVs, se conoce muy poco sobre cómo las proteínas receptoras, sus ligandos y componentes moleculares, siguen rutas específicas hacia estas vacuolas. El primer hallazgo al respecto, mostró que la clasificación y transporte a las PVs de la proteína de membrana ESCP y la fosfatasa ácida soluble (AcPh) dependen de la adaptina AP-l y clatrina. Sin embargo, el receptor que mediaría la interacción entre AcPh y AP-l no había sido descripto. Así, mediante el empleo de la proteína de fusión AcPh-V5j6xHis, se encontró que una proteína con un motivo tirosina (YQII) interactuaba con AcPh y que podía ser un candidato que funcionara como el receptor de clasificación para- la enzima. Esta proteína, llamada GIVps (del inglés, Giardía lamblia vacuolar prrotein sortíng). está localizada principalmente en el retículo endoplásmico (RE), la envoltura nuclear y en menor proporción en las PVs. El motivo YQII, presente en la porción citoplasmática C-terminal de GIVps, resultó esencial para su salida desde el RE y el transporte a las PVs y fundamental para la interacción con la subunidad media de AP-l. Finalmente, ensayos funcionales demostraron que la inhibición de la expresión de GIVps producía un defecto en la maduración y activación de AcPh, confirmando la participación del receptor en el transporte de enzimas solubles a las PVs. Estos resultados sugieren que, aunque Giardia carece de receptores de hidrolasas conservados, el mecanismo por el cual las proteínas solubles, tales como AcPh, llegan a las PVs es muy similar al mecanismo de clasificación de proteínas lisosomales de las células eucariotas más evolucionadas. El retrómero es un complejo proteico heteropentamérico que media el transporte retrogrado de los receptores de hidrolasas ácidas entre los endosomas y la red trans- Golgi (TGN) Y se encuentra conservado tanto en estructura como en función en una amplia variedad de organismos eucariotas. A diferencia de lo que sucede en otros organismos, el sistema de endomembranas del trofozoíto de Giardia es simple y se compone sólo del Retículo Endoplasmático (RE) y Vesículas Periféricas (PVs), las cuales se cree representan un sistema de organelas antiguas convergentes, con funciones de endosomas y lisosomas. La clasificación y el tráfico de proteínas de membrana y de hidrolasas solubles desde el RE a las PVs, han sido descriptos como específicos y conservados. Sin embargo, la participación del complejo retrómero en el reciclado de los receptores de hidrolasas no había sido definida en este parásito. El complejo de proteínas retrómero, denominadas como proteínas de clasificación Vacuolar (del inglés, vacuolar protein sorting, Vps35p, Vps26p y Vps29p), está presente en el genoma de Giardia. En este Capítulo, serán descritos los resultados encontrados respecto a las características de dicho complejo en Giardia. Así, el clonado de la subunidad GIVPS35 y la producción de antisueros, permitió determinar la localización de esta proteína en las PVs como así también en el citosol. Por otro lado, la expresión de las tres subunidades 'PS35, GlVPS26 y GlVPS29 como proteínas de fusión unidas a una etiqueta de hemaglutinina (HA) en el extremo C-terminal, se utilizó para demostrar la asociación de las subunidades con las membranas, su localización subcelular específica y el grado de interaccíón entre las diferentes subunidades del retrómero. Los datos obtenidos a partir de ensayos de interacción proteína-proteína, revelaron una asociación directa entre la subunidad mayor GIVPS35y el receptor de hidrolasas solubles, GIVps.En conjunto, estos resultados proporcionan información original acerca de las interacciones moleculares que median el ensamblado del subcomplejo de selección de carga (subcomplejo G1VPS) del retrómero y de su participación en el reciclado del receptor de hidrolasas ácidas en este parásito.