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Trabajo realizado en: CIBICI – CONICET. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología. Departamento de Bioquímica Clínica. Facultad de Ciencias Químicas. Universidad Nacional de Córdoba.
Physical Description:
¿164? p. : il. col. ; 30 cm.
Audience:
Si presenta resumen La proteína StarD7, también conocida como GTT1 (Tumor Trofoblástico Gestacional 1, Gestational Trophoblastic Tumour 1), pertenece a la superfamilia de proteínas con dominio START involucradas en el transporte intracelular y metabolismo de lípidos. El ADNc de StarD7 se identificó mediante la técnica de “Differential Display” como un gen sobreexpresado en la línea celular de coriocarcinoma JEG-3 respecto a sus contrapartes benignas y se encuentra expresado de forma ubicua con altos niveles de expresión en las líneas celulares JEG-3, JAR, HepG2 y HT-29. Este transcripto codifica para una proteína de 295 aminoácidos con un peso molecular aproximado de 34,5 kDa y un punto isoeléctrico de 5,79. La secuencia de aminoácidos deducida de la secuencia de nucleótidos reveló una similitud del 25% con la proteína transferidora de fosfatidilcolina (PCTP) en el dominio conservado START. A su vez, el secuenciamiento del genoma de muchas especies señala la presencia de genes ortólogos a StarD7, prediciendo la existencia de proteínas StarD7 con alta homología en especies muy alejadas evolutivamente. El objetivo de esta tesis ha sido el estudio de los mecanismos que están implicados en la regulación transcripcional del promotor del gen StarD7 humano. Para tal fin, se utilizaron diferentes aproximaciones experimentales, tales como el clonado de las regiones 5´ corriente arriba del gen en vectores reporteros y la posterior evaluación funcional de las mismas, como así también la determinación de las interacciones ADN-proteína mediante ensayos de EMSA y ChIP. Adicionalmente, se evaluaron los cambios en los niveles endógenos de la proteína y su transcripto como consecuencia de la acción de diferentes estímulos mediante las técnicas de western blot y RT-PCR respectivamente. De esta forma, se realizó la primera caracterización funcional de la región promotora del gen StarD7 humano y se describieron algunos mecanismos de regulación, a nivel transcripcional, involucrados en la expresión de este gen. En ese sentido, se estableció la participación de la vía de señalización β-catenina/TCF4, del factor de transcripción SF-1 y de la vía del AMPc en la regulación de StarD7. También se demostró la interacción sinérgica entre β-catenina y SF-1 en la activación del promotor de StarD7. Por otro lado, se observó que el incremento en la disponibilidad de glucosa (condiciones de hiperglicemia) activa la expresión de StarD7 a través de un mecanismo que involucra la vía de la hexosamina. Concomitantemente al incremento de StarD7 también se observó el aumento de los niveles de β-catenina, sugiriendo la interacción de estas vías. Debido a la implicancia de estos mecanismos reguladores en numerosos procesos, tanto fisiológicos como patológicos, el trabajo aquí presentado proporciona nuevas perspectivas respecto a la asociación de los niveles de expresión de esta proteína con dichos procesos.
Bibliography:
Bibliografía: p. 124
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