| Summary: | El factor de transcripción KLF6 pertenece a la familia de reguladores transcripcionales Sp1/Krüppel-like, los cuales comparten un dominio conservado de unión al ADN del tipo dedos de zinc. La familia KLFs representa uno de los grupos más abundantes de reguladores, muchos de los cuales están involucrados en proliferación celular, diferenciación, oncogénesis y muerte celular, dichos procesos son objeto de intensas investigaciones a nivel mundial. KLF6, fue identificado en nuestro laboratorio sobre la base de sus propiedades de regular genes expresados en placenta humana. Más aún, se describieron por un lado, mutaciones que inactivan al gen klf6 en diversos canceres humanos, y por otro, la capacidad que posee KLF6 de contrarrestar la función de la proto-oncoproteína c-Jun luego de ser estimulada con drogas promotoras de tumor. Por lo tanto, se postula a KLF6 como el producto de un gen supresor de tumor. Sin embargo, el mecanismo por el cual KLF6 ejerce su función como supresor tumoral no ha sido completamente esclarecido. En el presente trabajo de Tesis Doctoral, se obtuvieron nuevos conocimientos respecto a la regulación de la estabilidad y la función biológica del factor de transcripción KLF6, mecanismos mediados por las vías de transducción dependientes de las MAP quinasas JNK y p38. Una activación persistente de ambas enzimas, JNK y p38, promueve una eficiente degradación de KLF6. Sin embargo, que la activación persistente de la quinasa JNK2 se correlaciona con el incremento de la translocación al núcleo de KLF6wt. Por lo contario, la inducción transitoria de estas enzimas luego de la radiación UV genera un incremento de la cantidad de proteína KLF6, el cual también es transitorio. Estos resultados permitieron hipotetizar que estos cambios en los niveles de KLF6 podrían estar relacionados a su función biológica a nivel celular en respuestas a señales de estrés que involucra a las quinasas JNK y p38 durante la radiación UV. Con el objetivo de analizar la función de KLF6 luego de la inducción de estas quinasas por UV, se utilizaron células derivadas de ratones knock-out, jnk1-/- ó jnk2-/-. Estas células muestran una respuesta diferencial a la apoptosis inducida luego de la radiación UV, mientras que la línea celular jnk2-/- es sensible, las células jnk1-/- son relativamente resistente a la apoptosis mediada por UV. Resulta interesante, que la expresión ectópica de KLF6 se correlaciona con un incremento significativo en la apoptosis mediada por UV en células jnk1-/-, las cuales son per se relativamente resistentes a ese estímulo de muerte. La inhibición específica de la quinasa JNK2 restaura parcialmente la resistencia a la apoptosis de las células jnk1-/-, mientras que la inhibición de la quinasa p38 anula el efecto mediado por expresión de KLF6. En conclusión, este desenlace de muerte celular mediado por KLF6 fue dependiente de la actividad de la quinasa p38 y, parcialmente, de JNK2. Los efectos observados fueron específicos para un contexto celular que expresa la enzima JNK2, ya que no fueron detectados en células jnk2-/- luego de la irradiación UV, las cuales son hipersensibles a la muerte por apoptosis frente a dicho estímulo. La inducción de la fosforilación de c-Jun luego de la expresión de KLF6 es una posible explicación para la susceptibilidad de las células jnk1-/- al UV. Así, la expresión de KLF6 en este contexto celular se correlaciona con el aumento transitorio tanto de c-Jun total como así también de c-Jun fosforilado. En ausencia de KLF6, c-Jun es deficientemente fosforilado por JNK2. A diferencia de ello, la expresión de KLF6 contribuye a un incremento en la fosforilación de c-Jun que, aunque transitoria, podría ser suficiente para gatillar el cambio o “switch” funcional de p53 desde el arresto del ciclo celular hacia la vía apoptótica luego de la radiación UV. Más aún, la expresión de KLF6 se correlaciona con un aumento en los niveles de transcripto p53 así como de la actividad del promotor p73 y activación de las caspasas efectoras -3/-7, todos involucrados en mecanismos inductores de apoptosis. Estos resultados aportan evidencias experimentales acerca del rol de KLF6 para inducir apoptosis. Por otra parte, con el objetivo de investigar este mecanismo en un contexto donde un estímulo biológico sea capaz de desencadenar tanto mecanismos de proliferación ó de apoptosis, se analizó la expresión de KLF6 endógeno durante la infección con Adenovirus en células epiteliales de pulmón. Las proteínas oncogénicas de Adenovirus, tanto E1A como E1B, se expresan tempranamente durante la infección. La expresión de KLF6 se indujo aún más temprano que E1A, luego de 6 hs. post infección, correlacionándose con un marcado incremento en la expresión de p21CIP1/WAF1, sugiriendo un arresto del ciclo celular en esta etapa, previniendo de esta manera la propagación viral. A tiempos tardíos post infección, se observó el incremento de c-Jun fosforilado con la concomitante disminución de p21CIP1/WAF1, sugiriendo que el ciclo celular ya no se encontraría arrestado. En esta situación, estarían dadas las condiciones para que tenga lugar el “switch” apoptótico mediado por c-Jun fosforilado. En tal caso, el desenlace resultaría en una infección finalmente abortiva. Estos resultados sugieren que la función de KLF6 en la apoptosis podría estar relacionada a mecanismos de respuesta celular a infecciones por Adenovirus, el cual expresa onco-proteínas. Basado en los resultados presentados, un mecanismo interesante por el cual KLF6 media su función como supresor de tumor podría involucrar la inducción de las propiedades pro-apoptóticas descriptas para la forma hiper-fosforilada de c-Jun. Si éste rol de KLF6 es inducible por estímulos de señalización oncogénica y si el mismo es operativo en el contexto de células tumorales, es un tema apasionante para su investigación en un futuro próximo.
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