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La enfermedad de Alzheimer (EA) es la patología neurodegenerativa más frecuente asociada al envejecimiento, para la cual aún no existen terapias efectivas. Se caracteriza por la acumulación en el cerebro del péptido beta amiloide (Aβ), que se origina a partir de la proteólisis de la proteína precurs...
La enfermedad de Alzheimer (EA) es la patología neurodegenerativa más frecuente asociada al envejecimiento, para la cual aún no existen terapias efectivas. Se caracteriza por la acumulación en el cerebro del péptido beta amiloide (Aβ), que se origina a partir de la proteólisis de la proteína precursora del beta amiloide (APP). APP es una glicoproteína transmembrana capaz de mediar los efectos tóxicos producidos por Aβ mediante la interacción con la proteína Go, para la cual es clave la presencia del doblete de histidinas H657 y H658 en APP. Por otro lado, se ha visto que la desregulación de la homeostasis del Ca2+ intracelular acompaña el proceso degenerativo en la EA, y está asociada, al menos en parte, a la deposición de Aβ aunque aún no se conoce el mecanismo subyacente. A partir de esto, nuestra hipótesis es que la señalización APP-Go participa en la desregulación del metabolismo de Ca2+ inducido por las formas agregadas de Aβ y que la sustitución de la histidina 658 por prolina en APPhp afectará esa señalización. Es por ello que se plantearon los siguientes objetivos específicos: 1. Generar cultivos celulares que sobreexpresen Goα y APPwt o APPhp y establecer las condiciones experimentales para medir los cambios dinámicos en los niveles intracelulares de Ca2+ . 2. Analizar comparativamente el efecto de la señalización de APPwt-Go y APPhp-Go en la regulación de la dinámica de Ca2+ intracelular en respuesta a formas patológicas de Aβ. Para ello se trataron con Aβ25-35 cultivos de células N2a previamente transfectados con Goα y APPwt o APPhp y posteriormente mediante videomicroscopía se registraron los cambios en la dinámica del Ca2+ intracelular mediante el indicador Cal-520-AM. Si bien se observaron diferencias en el número de oscilaciones espontáneas de Ca2+ y la amplitud de las mismas entre las diferentes condiciones experimentales, estas no resultaron consistentes a lo largo de las distintas réplicas realizadas. A partir de estos resultados a futuro se espera poder ajustar el modelo, para obtener datos consistentes y poder reproducir fenómenos previamente descritos.
