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Estudio de la recombinación génica en bacterias Gram-negativas. Efecto de RecA y el MRS sobre la recombinación de secuencias homólogas y parcialmente homólogas.
La recombinación genética es un proceso biológico esencial en el metabolismo de todos los organismos, que permite la reorganización de material genético entre y dentro de los cromosomas. Participa en la regulación de un gran número de genes, provee una de las mayores vías de reparación de rupturas d...
La recombinación genética es un proceso biológico esencial en el metabolismo de todos los organismos, que permite la reorganización de material genético entre y dentro de los cromosomas. Participa en la regulación de un gran número de genes, provee una de las mayores vías de reparación de rupturas del ADN doble cadena y permite la generación de variabilidad genética en las poblaciones, tanto eucariotas como procariotas. Es así que la recombinación promueve la diversidad genética, a la vez que permite mantener la identidad del genoma. El proceso de recombinación requiere de la participación de un gran número de proteínas, y puede dividirse en tres etapas principales: pre-sinapsis, sinapsis y post-sinapsis Durante la sinapsis ocurre el intercambio de cadenas entre moléculas de ADN, siendo esta la etapa clave del proceso de recombinación. Este paso es catalizado en bacterias por las recombinasas de la familia RecA las cuales catalizan la búsqueda de homología entre las moléculas, la cual es indispensable para que se lleve a cabo el intercambio de hebras. Es precisamente esta cualidad de la recombinasas la que actúa como una primera barrera para evitar la recombinación de secuencias divergentes (homeólogas) Por otro lado las proteínas del Sistema de Reparación de Bases Apareadas Incorrectamente (MRS) actúan como una segunda barrera, asegurando que secuencias con altos niveles de divergencia no recombinen entre sí. El control de la recombinación entre secuencias divergentes resulta de gran importancia para el mantenimiento de la identidad del genoma de los organismos, ya que el intercambio entre moléculas altamente divergentes puede generar mutaciones deletéreas, interrupción de genes u/o alteraciones en la expresión de los mismos. El objetivo general de este trabajo se cerztra en contribuir al conocimiento de la recombinación de secuencias homólogas y homeólogas en bacterias Gramnegativas. En base a resultados previos obtenidos en nuestro laboratorio, planteamos la hipótesis de la existencia de un mecanismo de recombinación independiente de RecA en P. aeruginosa. Los objetivos particulares del presente trabajo se dirigieron a aportar nuevas evidencias que sustenten esta hipótesis. Para abordar este objetivo se construyeron cepas mutantes deficientes en los genes rec.4 y recA/ rnutS y se analizó la recombinación homóloga y homeóloga de las mismas mediante ensayos in vivo. Los resultados obtenidos en esta Tesina de grado indicaron que la recombinación homeóloga prácticamente no disminuye en cepas deficientes en recA. Esto coincide con ¡o observado previamente en nuestro laboratorio. Además, se corroboró la función inhibitoria de MutS sobre la recombinación homeóloga, tanto en la vía dependiente, como independiente de RecA. Por otro lado, se encontró que, en un porcentaje de clones, se produce un importante número de sustituciones y pequeñas insercionesi’deieciones, indicando la existencia de un mecanismo altamente mutagénico. Por otra parte también se detectó que un porcentaje de los eventos de recombinación independientes de RecA observados serían llevados a cabo por un mecanismo de Apareamiento de Simple Hebra (Simple Strand Annealing, SSA), el cual no esta descripto aún en P. aeruginosa.
