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Producción de B-Galactosidasa recombinante y su interacción con interfases lipìdicas
En este trabajo, se sobreexpresó una (3-galactosidasa recombinante (P-GalHis) en la bacteria Escherichia coli (E. coli). Esta enzima recombinante contiene en la secuencia primaria 6 residuos de histidina en el carboxilo terminal lo que facilita la purificación, aunque la diferencia de la enzima nati...
En este trabajo, se sobreexpresó una (3-galactosidasa recombinante (P-GalHis) en la bacteria Escherichia coli (E. coli). Esta enzima recombinante contiene en la secuencia primaria 6 residuos de histidina en el carboxilo terminal lo que facilita la purificación, aunque la diferencia de la enzima nativa (P-Galwi-) en su estructura primaria. Nuestros estudios se enfocaron, en primer lugar, en estudiar la relación estructura/actividad de ambas p-galactosidasas (recombinante y nativa) (P-Gals) en solución, para luego analizar el comportamiento enzimàtico en presencia de vesículas multilamelares (MLVs) de diferente composición. Nuestra hipótesis es que la alta densidad de cargas positivas adicionales en P-GalH¡s (provenientes de los residuos de histidina) favorece la interacción de la proteína con interfases cargadas negativamente acrecentando el efecto mostrado frente a interfases neutras. Los resultados demostraron que la presencia de los residuos de histidinas en P-GalH¡s inducen una disminución de la actividad enzimàtica (KM aumenta y Vmáx disminuye) con respecto a la correspondiente a P-GalWT en solución. Este resultado estaría relacionado con una estructura aparentemente “más empaquetada” de la enzima (según lo observado por fluorescencia intrínseca del Trp). Por otro lado, en presencia de interfases lipídicas se observó una mayor actividad de p-GalHis cuando las formulaciones de las MLVs consistieron en PC o PC-PG, siendo esta última formulación la que demostró una potenciación del efecto. Este último resultado podría estar relacionado también con un efecto más acentuado de las MLVs de PC-PG sobre la estructura de la enzima comparada con lo observado con interfases neutras(PC).