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Estudio de la expresión del factor de transcripción proneural Neurogenina 3 en un modelo de ratón transgénico para el gen SRY.
El fenotipo del cerebro está determinado por las hormonas generadas por las gónadas durante el período crítico de desarrollo (E18-PN10). A lo largo de los aftos se han acumulado evidencias que muestran la existencia de diferencias sexuales antes del período critico. Trabajos previos de nuestro labor...
El fenotipo del cerebro está determinado por las hormonas generadas por las gónadas durante el período crítico de desarrollo (E18-PN10). A lo largo de los aftos se han acumulado evidencias que muestran la existencia de diferencias sexuales antes del período critico. Trabajos previos de nuestro laboratorio han demostrado que las neuronas hipotalámicas hembra presentan una diferenciación neurítica acelerada comparada con las neuronas de machos y además, niveles más altos de ARNm del factor neuritogénico neurogenina 3 (Ngn3). Ngn3 pertenece a un grupo de genes proneurales que se expresa en el páncreas embrionario y durante el desarrollo en el sistema nervioso. Ngn3 está involucrado con la vía de señalización de Notch en el control de la morfología dendrítica y la conectividad sináptica de neuronas hipocampales y su expresión está controlada negativamente por la actividad del receptor Notch. Si bien no se puede negar el rol indiscutible de los esteroides gonadales en el dimorfismo sexual, nos propusimos analizar la participación relativa de los cromosomas sexuales y del estradiol en la determinación de las diferencias sexuales del cerebro antes del período crítico, evaluamos los niveles de ARNm de Ngn3 en cultivos de ratones transgénicos los cuales combinan una deleción del gen Sry del cromosoma Y (gen determinante de los testículos) y su posterior re-inserción en un autosoma. Este modelo comprende machos gonadales XX y XY (XXM y XYM) y hembras gonadales XX y XY (XXH y XYH) por lo que se puede evaluar diferencias entre individuos con distinto complemento cromosómico sexual que poseen el mismo fenotipo gonadal. Se realizaron cultivos de neuronas hipotalámicas de embriones de E14 segregados por sexo y genotipo. Después de 72 horas in vitro algunos cultivos fueron incubados por 2 horas con 17 (3-estradiol (E2; 10'10M) o vehículo. Posteriormente se extrajo el ARN y se obtuvo el ADNc por transcripción reversa. Los niveles de ARNm para el gen Ngn3 fueron Plantificados por PCR en tiempo real. Las neuronas portadoras del complemento ¡losómico XY (XYM y XYH) mostraron niveles de expresión de Ngn3 más bajos que neuronas portadoras del complemento cromosómico XX (XXM y XXH) idientemente del fenotipo gonadal. Con respecto al tratamiento con la hormona, los ¡^üvos tratados con E2 mostraron niveles significativamente más altos de Ngn3 solo en Ivos de neuronas con complemento cromosómico XY, sin importar el tipo gonadal fM y XYH). E2 no tuvo efectos significativos sobre los niveles de expresión de Ngn3 cultivos XX. Estos hallazgos indican que las diferencias sexuales encontradas en la expresión del gen autosomal Ngn3 podrían ser el resultado de la regulación diferencial por parte de genes de los cromosomas X e Y que resultan de herencia de dos copias de X o la presencia/ausencia del cromosoma Y de los cromosomas sexuales. En conjunto estos resultados muestran que la expresión sexualmente dimórfíca del factor neuritogénico Ngn3 depende de los cromosomas sexuales y que estradiol anula dichas diferencias sexuales a través de un mecanismo que depende del complemento sexual. De esta manera las acciones de los cromosomas sexuales (autónomas o dependientes de las hormonas) podrían estar actuando de forma paralela o interactuando para producir o reducir las diferencias sexuales en el cerebro en desarrollo.
