Uso de vectores lentivirales para evaluar la participación de la proteína precursora de amiloide (APP) en la neurodegeneración inducida por Amiloide B

La enfermedad de Alzheimer es una de las enfermedades de mayor importancia médica de ia actualidad. La patología se caracteriza por un deterioro intelectual progresivo asociado a la acumulación cerebral de placas extracelulares de amiloide (3 (A(3) y ovillos neurofibrilares intracelulares de proteín...

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Bibliographic Details
Main Author: Pinotti, Juan Diego
Other Authors: Bignante, Anahí (Co-Dir.)
Format: Thesis Book
Language:English
Published: Córdoba: [s./n.], 2014
Subjects:
Description
Summary:La enfermedad de Alzheimer es una de las enfermedades de mayor importancia médica de ia actualidad. La patología se caracteriza por un deterioro intelectual progresivo asociado a la acumulación cerebral de placas extracelulares de amiloide (3 (A(3) y ovillos neurofibrilares intracelulares de proteína tau anormalmente fosforilada. La deposición y agregación de Ap dispara una serie de eventos moleculares que conllevan a la degeneración y muerte neuronal. Es indiscutible que la proteína precursora de amiloide (APP) es la única fuente de A(3. Por otra parte, existe creciente evidencia de que APP estaría implicada en los mecanismos de toxicidad causados por la agregación de A(B. Evidencias in vitro sugieren que la unión A(3 al APP activa una cascada de señalización mediada por la proteína heterotrimérica Go que conllevaría en última instancia a la muerte neuronal. A fin de generar herramientas que permitan estudiar el rol de APP en la degeneración inducida por A(3 en cultivos neuronales, empleamos partículas lentivirales para transducir APP humano en cultivos primarios hipocampales. Se diseñaron partículas lentivirales de expresión específica para neuronas. La transducción de las proteínas exógenas fue monitoreada a través de la fluorescencia de la proteína fluorescente amarilla con un péptido señal mitocondrial (mYFP).Se diseñaron vectores que codificaran para el APP salvaje (APPwt-mYFP), una variante de APP con una mutación puntual en el sitio de unión a Go (APPhp-mYFP) y vectores que codificaran únicamente la proteína reportera (EV-mYFP). Cultivos neuronales infectados con las partículas virales generadas fueron tratados con vehículo (control) o A(3 y la toxicidad fue evaluada analizando la longitud total de dendritas (neuritas MAP-2 positivas) y la densidad sináptica (agregados de sinaptofisina). Se encontró un significativo efecto de A(3 en todas las condiciones pero no se encontraron diferencias entre los cultivos no infectados y los infectados con APPwt-mYFP, APPhp-mYFP o EV-mYFP. Sorprendentemente, no se logró comprobar la expresión exógena de APP en ninguno de los cultivos infectados a pesar de encontrar una evidente fluorescencia de YFP, indicativa de una efectiva infección lentiviral y transducción de la correspondiente proteína exógena. Debido a limitaciones de tiempo no se pudo comprobar la causa por la cual las partículas lentivirales utilizadas expresaron altos niveles de YFP y niveles no detectables de APP. A pesar de ello, y en función de la viabilidad de las neuronas infectadas y la expresión de la YFP, nuestros datos indican que los vectores lentivirales son una herramienta efectiva para expresar proteínas exógenas en cultivos neuronales.
Physical Description:35 h.; grafs.; tbls.