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Aislamiento y caracterización de Fosfolipasa (PLA2) del veneno de Bothrops alternatus (Víbora de la Cruz) del Nordeste Argentino
RESUMEN En este trabajo de Tesis se aisló una fosfoiipasa A2 del veneno de Bothrops alternatus del nordeste argentino, denominada Ba Spll RP4, con referencia a las cromatografías utilizadas para su purificación. Fue secuenciada de novo y analizada su secuencia primaria. Consiste de 121 aminoácidos y...
RESUMEN En este trabajo de Tesis se aisló una fosfoiipasa A2 del veneno de Bothrops alternatus del nordeste argentino, denominada Ba Spll RP4, con referencia a las cromatografías utilizadas para su purificación. Fue secuenciada de novo y analizada su secuencia primaria. Consiste de 121 aminoácidos y presenta el Asp (D) en posición 49 que determina una enzima catalíticamente activa. Su masa molecular (SDS-PAGE y espectrometría de masa) dio un valor de -14 y -28 kDa en condiciones reducidas y sin reducir. Se calculó, con base en ia secuencia primaria, su punto isoeléctrico (pl) que arrojó un valor teórico de 4.88. Además, ía enzima mostró: hemolisis indirecta (DHiM = 0.67 ug), edema (DEM =36 Hg), alargar el tiempo de la coagulación e inhibir la agregación plaquetaria, aunque carece de actividades bactericida, miotóxica, citotóxica y letal aun a dosis muy altas. Los anticuerpos anti-Ba Sptl RP4 exhibieron especificidad frente a su antígeno homólogo y al veneno. Las IgG anti-PLA2 neutralizaron totalmente las actividades catalítica y hemolttica (indirecta) del veneno, en tanto, la capacidad neutralizante fue parcial frente a la inhibición de la miotoxicidad, citotoxicidad y letalidad del veneno entero. Como la enzima no exhibe tales actividades per se, pero los anticuerpos que genera son capaces de neutralizar, al menos en parte, las actividades deletéreas del veneno, pone en evidencia un activo rol (sinergismo) en la toxicidad que induce el veneno, hasta ahora no descripto en la literatura para fosfolipasas acídicas.
Physical Description:
186 h. + Apéndice de Publicaciones. ils. col.; grfs.; tbls.