Modificaciones en los niveles de proBDNF, TrkB y pTrkB inducidas por hiperactividad neuronal en un modelo in vitro de Status Epilepticus

RESUMEN Las Neurotrofinas (NT) son proteínas liberadas por las neuronas al espacio extracelular que se unen a receptores de membrana de alta afinidad de células vecinas, influyendo en la expresión génica de las mismas. Entre ellas, se encuentra el Factor Neurotrófico Derivado del Cerebro (BDNF) que interacciona tanto con el receptor TrkB, señalando para mediar en la sobrevida celular, como con el receptor p75ntr, activando señales en cascada que resultan en el inicio de procesos apoptóticos. Las formas inmaduras de las NT (proNT) también son liberadas al espacio extracelular ejerciendo distintas funciones biológicas. El proBDNF interacciona con el receptor p75ntr, utilizando como co receptor a la sortilina, exacerbando las señales en cascada de muerte neuronal en mayor medida a lo que lo hace el BDNF. El Sfafus Epilepticus (SE) es una condición patológica del Sistema Nervioso Central que induce muerte neuronal, entre otras regiones, en el hipocampo. La experimentación in vivo ha demostrado que la disminución de los niveles del receptor TrkB y el aumento de los niveles del receptor p75ntr son eventos que anteceden a la muerte neuronal. Por lo tanto, el objetivo principal de este trabajo fue caracterizar, establecer y evaluar si un modelo de SE in vitro utilizando cultivos de neuronas hipocampales reproduce condiciones similares a las observadas en experimentación in vivo. Previo al desarrollo de los objetivos específicos planteados, los primeros experimentos fueron dirigidos a corroborar el modelo de SE in vitro, mediante la medición de la dinámica en la concentración de calcio intracelular. Posterior a esto, este trabajo se centró en determinar, mediante dos técnicas distintas y complementarias, la curva temporal de la muerte inducida por 3 horas de SE in vitro. Además se determinaron los niveles de las proteínas TrkB, pTrkB y proBDNF tanto en membrana como los niveles totales, mediante Inmunocitoquímica y WB, con la finalidad de conocer si el SE provocaba modificaciones tanto en los niveles de proBDNF/BDNF como en los de sus receptores, TrkB y p75ntr, con la posibilidad de relacionar estos cambios con el inicio de la muerte neuronal registrada. Por último, se realizaron distintos ensayos biológicos utilizando un extracto alcaloide obtenido de Huperzia saururus en el cultivo de neuronas hipocampales y en el modelo de SE in vitro, con la finalidad de determinar si poseía efectos en la sobrevida neuronal. Los resultados obtenidos muestran que el SE efectivamente induce aumentos en la muerte neuronal a las 6 horas de finalizado el estímulo. Además el SE provocó aumentos significativos tanto en la síntesis como en la movilización hacia la membrana plasmática del receptor TrkB. Los niveles observados de pTrkB nos indican que la señalización por BDNF se encuentra incrementada en los dos puntos temporales analizados. Al mismo tiempo, el SE no provocó aumentos en la síntesis de proBDNF, pero sí que su liberación se incremente significativamente a las 6 horas de finalizado el estímulo. Por último, los resultados obtenidos utilizando el extracto alcaloide en este modelo permitieron demostrar que este extracto posee efectos que aumentan la sobrevida neuronal. En conclusión, los resultados obtenidos indican que este modelo de SE in vitro representa una situación comparable a la observada in vivo y hace factible su utilización

• Main Author: Danelon, Victor
• Format: Thesis Book
• Language: English
• Published: Córdoba: [s./n.], 2011
• Subjects: TESINA; NEUROTROFINAS; SISTEMA NERVIOSO CENTRAL; BIOLOGIA CELULAR; APOPTOSIS; ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS; EPILEPSIA; NEUROCIENCIA
• Physical Description: 44 h.; grfs. col.