| Summary: | Las enfermedades metabólicas con compromiso neurológico son un área de gran interés médico en los últimos años y constituyen un capítulo amplio dentro de las patologías hereditarias. Estas alteraciones genéticas no tienen un tratamiento etiologico y el manejo terapéutico es sintomático en algunos casos y paliativo en el resto. En particular, el objetivo de este trabajo de Tesina fue contribuir en primera instancia al desarrollo de un capítulo inédito en nuestro país, en el área de tas Enfermedades Metabólicas Hereditarias en referencia a dos patologías: A- Desórdenes Congénitos de la Glícosilación, sigla en inglés (CDG) y B- Lipofuscinosis Ceroidea Neuronal Tipo 2, sigla en inglés (CLN2). Los objetivos específicos, respecto a CDG, estuvieron orientados a estandarizar e implementar el análisis del estudio de 0-glicanos tipo Mucina en pacientes con sospecha de alteraciones combinadas de N-y Oglicosilación proteica y respecto a CLN2, conocer el grado de expresión proteica y el estado de glicosílación de la proteína tripeptidi!-peptidasa-l (TPP1) en correlación con los diferentes aspectos (clínicos, enzimáticos y moleculares), estudiados previamente por el grupo de la Ora. Inés Halac. La metodología utilizada fue el isoelectroenfocado para el análisis de la proteína apo-CIII en sueros de pacientes con sospecha de alteraciones combinadas de N-y O-glicosilación proteica y Western blot de la proteína TPP1 sérica en pacientes CLN2 y controles normales. A partir de los resultados observados se concluyen en los siguientes aspectos: a) La implementación del estudio de la 0-glicoproteína apo-Clll, contribuyó al diagnóstico de CDG en nuestro país, en particular referido a las alteraciones combinadas de N-y O-glicosilación proteica, estos estudios en conjunto permitieron identificar alteraciones en dos pacientes argentinos que fueron diagnosticados con CDG-lx, que quedan a la espera de nuevas metodologías que permitan dilucidar la clase de COG, e incluso abren las posibilidades al hallazgo de nuevos tipos de CDG en nuestro medio, b) Respecto al análisis de expresión y estado de glicosílación de la proteína tripeptidll peptidasa-l (TPP1), se observó que TPP1 se encuentra presente en las fracciones estudiadas (suero, saliva y leucocitos) en controles normales o estado patológico (pacientes CLN2). La presencia de TPP1 humana en suero no descrita anteriormente en la literatura, por estudios previos del grupo de la Dra. Inés Halac, se había observado que había actividad enzimática cuantificable en controles normales en ninguna de las condiciones experimentales ensayadas, sin embargo en saliva la TPP1 mantiene actividad enzimática cuantificable. Postulamos que TPP1 sería excretada mediante mecanismos de excreción diferencial de proteínas con plegamiento erróneo en el caso de suero y por fusión vesicular del lisosoma con vesículas secretoras que vierten su contenido lisosomal en saliva. Estos procesos serían comunes en condiciones normales o patológicas, c) Respecto al estado de glicosifación de TPP1, no se observaron diferencias cuando las fracciones fueron tratadas con la enzima PGNasa F, sin embargo se detectaron bandas diferenciales entre controles normales y el paciente CLN2 (OG) cuando fue deglicosilada la proteína. En suero, está observación podría ser consistente con la inaccesibilidad de la glicanasa en los fragmentos secretados, d) En particular, los resultados observados en el paciente CLN2 (OG) conjuntamente con la determinación del 2,5 % de actividad enzímática de TPP1 mutada, podrían explicar la presentación "protracted" o tardía de las manifestaciones clínica de la enfermedad, e) Si bien la naturaleza específica de las diferencias encontradas entre las fracciones estudiadas de pacientes CLN2 y controles, han sido analizadas en este trabajo de tesina acorde a la especificidad de la metodología utilizada, estas observaciones podrían contribuir en la comprensión de la complejidad de los posibles mecanismos y rutas metabólicas involucradas en estas enfermedades.
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