| Summary: | Resumen: La Nitrato Reductasa (NR) es una enzima citosólica que cataliza la reducción de nitrato a nitrito (Kaiser et al, 1999). Debido a la toxicidad de los intermediarios que se encuentran en la vía de reducción y asimilación del nitrato, la NR está estrictamente regulada a nivel transcripcional y también a nivel metabólico por dos vías principales, una reversible y rápida, y otra irreversible y más lenta, que involucra su degradación. En hojas de avena se encontró que entre los diversos factores que regulan la actividad de NR se encuentran los azúcares. La estabilidad de NR mediada por Glc estaría regulada por, aparentemente dos mecanismos: uno iniciado por una alta concentración de Glc, que involucraría a una proteín Kinasa y otro iniciado por una baja concentración de Glc, donde participaría una proteín fosfatasa. Ambos mecanismos requerirían la entrada citoplasmática de Ca(2+) apoplástico (Monteoliva et al, 2006). Las especies activas de oxigeno (ROS) están siendo reconocidas como componentes de diversas vías de señalización en los vegetales y paralelamente existen evidencias que los azúcares pueden modificar el equilibrio de las ROS en las células. En efecto, la provisión de azúcares al metabolismo primario resulta en un aumento del poder reductor que puede ser utilizado para completar la reducción de las ROS. Por otro lado, se ha visto que la acumulación de azúcares puede promover un incremento en la generación de ROS. Por esto, se ha propuesto que los azúcares solubles son parte de un conjunto de defensas y señales que son útiles a las plantas para censar y controlar el balance redox celular. Por lo tanto, podría esperarse que en el efecto estabilizador in situ, de los azúcares sobre la Nitrato Reductasa foliar, involucre también variaciones en el nivel de ROS. La inestabilidad normal de NR (en ausencia de glucosa) no fue alterada por secuestradores genéricos de ROS, tales como, KI, MnCl(2) y cisterna (IMnC). En cambio, el Tirón, un secuestrador específico de O(2)- estabilizó la NR. La estabilización de NR inducida por Glc, fue inhibida por IMnC, esto sugirió que alguna ROS podría estar involucrada en este proceso. PEG 8000 también estabilizó NR y este efecto fue también inhibido por IMnC. Por otro lado, incubaciones de extractos crudos con IMnC y Tirón no modificaron la actividad NR, descartando así un eventual efecto directo de estos compuestos sobre la actividad NR. La estabilización de NR inducida por cualquiera, Glc, PEG o Tirón, requirió que la NADPH oxidasa y la SOD estuvieran activas. En presencia de sus inhibidores específicos, difeniliodonium (DPI) y dietilditiocarb amato (DDC) respectivamente, la Glc rué incapaz de estabilizar la NR. La adición de Ü^Oz exógeno pudo revertir esta inhibición inducida por DPI y DDC, solo cuando la Glc estaba presente, indicando esto la existencia de un mecanismo de estabilización de NR, iniciado específicamente por el azúcar. Por otro lado, el EGTA también inhibió la estabilización de la NR. Sin embargo esta inhibición pudo ser revertida por la adición de H(2)O(2) exógeno siempre y cuando estuviera presente la Glc. El agregado de 10 mM de CaCl (2) a tratamientos con Glc, en presencia de IMnC, DPI y DDC no restableció el efecto estabilizante del azúcar. En conjunto estos resultados sugieren que el H(2)O(2)sería el efector de la estabilización de la NR inducida por Glc.
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