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Desarrollo de resistencia de amplio espectro a Tospovirus por RNAi
La generación de resistencia derivada de patógeno (PDR) mediante la utilización de plantas transgénicas con secuencias virales ha sido aplicada de manera creciente en los últimos 20 años. Esta tecnología basada originalmente en la transformación genética de plantas con genes virales se modificó radi...
La generación de resistencia derivada de patógeno (PDR) mediante la utilización de plantas transgénicas con secuencias virales ha sido aplicada de manera creciente en los últimos 20 años. Esta tecnología basada originalmente en la transformación genética de plantas con genes virales se modificó radicalmente a partir de construcciones génicas con secuencias virales repetidas de manera invertida (hairpins). Estas construcciones son mucho más eficientes como disparadores del silenciamiento de RNA (S-RNA). Este nuevo sistema, aunque eficiente en su capacidad de generar una gran respuesta de silenciamiento de RNA, sigue siendo limitado por su naturaleza de secuencia altamente específica por lo que solo es utilizable contra una única especie viral. En este trabajo se presenta una aplicación de esta estrategia optimizada que, utilizando construcciones de longitud mínima y de una única región conservada de una especie viral, permite el knock-downv simultáneo del gen de la nucleocápside de tres especies de Tospoviws resultando en una resistencia transiente múltiple a los tres virus. Con esta finalidad se desarrollaron y evaluaron diferentes construcciones génicas portadoras de secuencias virales de los Tospovirus presentes en Argentina. Se identificó y aisló una secuencia perteneciente al gen de la proteína de la nucleocápside que presenta una homología nucleotídica cercana al 90% para las tres especies de Tospovirus (l'omato spotted wlt virus (TSWV), Groundnut ring spot virus (GRSV) y Tomato chlorotic spot virus (TCSV) de la Argentina. De esta manera se intentó ampliar el espectro de la resistencia dirigiendo el silenciamiento a más de una especie viral. De los resultados obtenidos se deduce la efectividad del método validado mediante técnicas de expresión transiente utilizando proteínas de fusión con el gen reportero de la Green Fluorescent Protein (GFP) y de inoculación viral mecánica en plantas de Nicotiana benthamiana.
